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鸡抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA Kit
起批量(48T/96T 价格
≥1 ¥1200元/48T/96T
  • 供货能力:99
  • 最低订购量:148T/96T
  • 可销售总数量:9948T/96T
  • 建议零销价:1200元/48T/96T
  • 发布日期: 2017-10-24
  • 更新日期: 2018-09-28
产品详细说明
品牌: 艾泽拉斯 产地: 国产
样本: 血清、血浆、尿液、细胞培养上清、组织标本 标记物: HRP
应用: 仅用于科研 检测方法: 酶联免疫双圄墉心法
检测限: 详见说明书 数量: 99
货号: EK-4048

艾泽拉斯生物专业生产销售Elisa试剂盒、标准品对照品、生化试剂、中间体等产品,真诚希望为您的教学科研提供*的产品和专业的服务。我们以*的自己去对待身边的每一个人,我们是朋友,是兄弟,是知己!我们不求尽如人意,但求问心无愧!

产品介绍:
【规格】:96T/48T
【类别】:一档(常规实验);二挡(高精准实验)
【种属】:可提供各类种属标本课题
【保存】:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)
【保质期】:6个月。
【实验原理】
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1、酶联板:一块(96孔;48孔)
2、标准品:2瓶
3、样品稀释液:1×20ml/瓶
4、生物素标记抗体稀释液:1×10ml/瓶
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液:1×10ml/瓶
6、生物素标记抗体:1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根过氧化物酶标记亲和素:1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液:1×10ml/瓶
9、浓洗涤液:1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液:1×10ml/瓶
【实验材料与试剂配制】
1、仪器与材料:酶标仪(使用前预热30分钟),微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水,滤纸。
2、洗液的配制:按比例配制洗液备用。
【样品收集、处理及保存】
1、细胞培养上清:
适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液,以1000×g离心15分钟,收集上清。
2、细胞:
用PBS反复洗涤细胞3次,调整细胞浓度达到104-106/ml 左右,通过反复冻融,使细胞破坏并放出细胞内成份,或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。
3、血清:
在室温下,血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。
4、血浆:
应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置10-20分钟后,以1000×g离心15分钟,收集上清。
5、体液:
包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集,以1000×g离心15分钟,收集上清。
6、组织标本:
切取组织标本,称取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或匀浆器,或超声破碎仪将标本匀浆,以2000-3000rmp离心20分钟,收集上清进行检测。
样品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
7、保存:
如果样品不能立即检测,应将其分装,-70℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
【操作步骤】
1、取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。
2、分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。10个标准孔,1个空白对照
3、标准品的稀释:准备小试管6只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul 加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0 号标准品。
4、加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入50ul的蒸馏水;其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
5、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
6、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒弃去,如此重复5次,拍干。
7、加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。
8、温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。
9、洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。
10、显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。
11、终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。
12、读板:在450nm波长读取各孔的OD值。
注:读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹,读板时间控制在终止反应后的30分钟内,以免影响准确性。
【数据计算】
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,即为样品的实际浓度。
六.注意事项:
1)实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。
2)加样:加样时,要控制加样速度,避免第一孔与*一孔间的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性。
3)孵育:严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。
4)建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。
5)建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商联系,如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。
【订货说明】
1)卖方确保所订产品与目录技术指标保持一致;
2)为了确保买方产品在运输中的质量,对有特殊要求的低温产品予以湿冰运输。
3)收到货物后如出现质量问题,买方需在收到货物一个月内向卖方提出书面异议。买方逾期不提出异议,视为货物符合其要求,卖方不付任何责任。
4)出现质量以外的问题,如破损等,买方应在收货后一个周内提出。买方未按时提出异议,视为该产品合格。